对人类中枢神经系统(CNS)组织中金属蛋白金属含量的研究可能会因制备技术而受到损害,因为制备技术会改变复杂混合物中金属和感兴趣的蛋白质的水平或相互作用。我们开发了一种结合尺寸排除色谱、天然等电聚焦、以及在电泳凝胶中进行质子或同步x射线荧光分析从少量(<20 mg)的人死后大脑和脊髓组织中纯化的铜锌超氧化物歧化酶(SOD1)的内源性金属含量。SOD1的异常金属化和聚集被怀疑在肌萎缩性侧索硬化症和帕金森病中发挥作用,但描述人体组织中SOD1金属占用的数据之前没有报道。为了验证我们的新方法,我们演示了逐步的金属保存、SOD1活性的保存以及SOD1蛋白相对于混杂的金属蛋白的大量富集。我们分析了来自9个健康个体和5个中枢神经系统区域(枕叶皮层、黑质、蓝斑、脊髓背侧和脊髓腹侧)的组织。我们发现,Cu和Zn与SOD1的结合比例为1.12±0.28,非常接近预期值1。我们的方法工作流可以应用于病理环境下的内源性天然SOD1的研究,并适用于来自人体组织和其他来源的一系列金属蛋白。
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